Compare the effect of ginger extract and aspirin on COX-2 gene expression in colon cancer cell line HT-29

Document Type: Original article

Authors

1 Graduated of Biochemistry, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran

2 Department of Biology , Faculty of Biochemistry, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran

Abstract

Background and aim: Colon cancer is the third most prevalent cancer in Iran. Prolonged colon inflammation is an important factor, in the development of colon cancer. Ginger has anti-inflammatory properties due to its content of [6]-gingerol and hence can play a role in the prevention of colon cancer. In this research the effects of ginger extract on reducing expression of the Cox-2 gene in HT-29 cells was studied in colon cancer.
Methodology: In this laboratory research, HT-29 cells of colon cancer were and the cells were trypsinated at the third passage and 5000 of them were cultured in the wells of 96-well plates. Ginger extract at four concentrations (10, 20, 30, and 40 mg/mL) was added to the wells, and the plates were incubated at 37˚C for 24, 48, and 72 hours in a 5% Co2 atmosphere. To study the effects of ginger extract on the cells, the MTT test was performed and the densities of the plates were read using an ELISA instrument. Total cellular RNA was extracted and expression of the COX-2 gene was investigated using the RT-PCR method.
Results and Discussion: The measured IC50 concentration of the ginger extract was 20 mg/ml. Determination of the expression of the COX-2 gene using the RT-PCR method indicated that the ginger extract at 20 mg/ml reduced expression of the COX-2 gene compared to using Aspirin. Therefore, ginger extract could be used as an anti-inflammatory drug against the HT-29 cells of colon cancer.  Reduction of inflammation is important in patients with colon cancer, and results of this research indicated use of ginger extract could play an important role in decreasing inflammation and in reducing the expression of the COX-2 gene, which has a significant role in the synthesis of prostaglandins and in causing inflammation.

Keywords


Article Title [Persian]

مقایسه اثر عصاره زنجبیل و آسپیرین بر بیان ژن COX-2 در سلول های دودمان سرطان کولون HT-29

Authors [Persian]

  • آرزو حقیقی 1
  • نوشا ضیا جهرمی 2
1 کارشناس ارشد بیوشیمی، دانشکده ی علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد
2 استادیارگروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد
Abstract [Persian]

مقدمه و هدف: سرطانکولونپسازسرطانریهدومین  عللمرگومیرناشىازسرطاندرجهان می باشد. عوامل محیطی و ژنتیکی نقش مهمی در بروز این سرطان ایفا می کنند. از عوامل مهم در ایجاد این سرطان التهابات طولانی مدت   کولون می باشد. زنجبیل به   دلیل داشتن ترکیب 6-جینجرول دارای خاصیت ضد التهابی است که در پیشگیری از سرطان کولون   نقش دارد.در سرطان کولون التهاب، از علائم اولیه آن محسوب می شود. در این مطالعه ­اثر عصاره زنجبیل­ بر بیان ژن -2­­COX   در سلول­های دودمان سرطان کولون  HT-29 بررسی شد.
روش تحقیق: در این مطالعه، سلول­های دودمان   سرطان کولون 29-   HT پس از کشت، ­در پاساژ   سوم تریپسینه شد و تعداد 5000 سلول در چاهک­­­های پلیت 96 خانه کشت داده شد .سپس سلول­ها با عصاره زنجبیل در   4 غلظت10، 20، 30 و40میلی­گرم برمیلی­لیتر تیمار   داده و پلیت­ها به مدت 24، 48و 72 ساعت در دمای 37 درجه سانتی­گراد،   5 درصد CO2 انکوبه گردید. به منظور بررسی تاثیر عصاره زنجبیل بر سلول­ها،تست MTT انجامو دانسیته نوری پلیت­ها توسط دستگاه   الایزا در طول موج 570 نانومتر قرائت شد. RNA توتال سلولی استخراج و توسط روش RT-PCR بیان ژنCOX-2  بررسی گردید.
نتایج و بحث: عصاره زنجبیل با غلظت 20 میلی   گرم برمیلی­لیتر بیشترین  IC50 را نشان داد. بیان ژن  COX-2 با روش RT-PCR  نشان داد، عصاره زنجبیل با غلظت 20 میلی گرم   بر میلی لیتر موجب کاهش بیان ژن COX-2  در مقایسه با داروی   آسپرین به عنوان یک داروی ضد التهاب درسلول­های دودمانHT-29 سرطان کولون می­شود.باتوجه به اهمیت کاهش التهاب در   بیماران مبتلا به سرطان کولون یافته­ها نشان داد که استفاده از عصاره زنجبیل می­تواند   نقش مهمی در کاهش التهاب و کاهش بیان ژن COX-2 که نقش مهمی در سنتز   پروستاگلاندین­ها و ایجاد التهاب دارد داشته باشد.
توصیهکاربردی/صنعتی:دراینبررسینقشعصارهزنجبیلوآسپیرینکهازداروهایضدالتهابموثراستقابلمقایسهبوده­است.لذابهنظرمی­رسدباتحقیقاتبیشتردرآینده،بتوانازآنبهعنوانیکراهکارجدیددرمانیبهرهبرد.

Keywords [Persian]

  • HT-29
  • زنجبیل
  • سرطان کولون
  • COX-2
  • آسپیرین
Berenda P, R. P., Rothenon,  A . 2011. Effect  of  Aspirin  on risk of colon cancer, LANCET. 11(12): 21-32.

Brenner K.M., Pox, CP3. 2014. Colorectal cancer. Lancet,  383 (9927): 1490-1502.

Carlson, M.L., Stephen, M . 2003. Regulation of COX-2 transcription in a colon cancer cell line by Pontin52/TIP49a. Molecular Cancer,  2(3): 42-45.

Garland, C.F.1980. Do sunlight and vitamin D reduce the likelihood of colon cancer?. Inter national Journal Epidemiol,  9(7): 227-231.

Geong S. B., Jungil, H., Fosdick, C . 2010. Cyp 2c9  and uGt  A6 Genotypes Modulate the Protective  Effect of Gigerole  on colon cancer. CancerResearch, 6(7): 62-66.

Giardielo, F.M., Krush, A. 1993. Treatmnt of colonic and rectal adenomas with sulindac in familial adenomatous polyposis. New England Journal of  Medical, 328(28): 133–136.

Hampel, F. W., Martin, E., Arnold, M., Khanduja, K., Kuebler, P, et al. 2005. Screening for the Lynch syndrome(hereditary nonpolyposis colorectal cancer). New England Journal Medical., 352(86) 185-186.

Hla, B. D., Liu, C.H., Schaefers, H.J., Trifan, O.C. 1999. Cyclooxygenase-1 and-2 isoenzymes. IYBCB, 31(45): 551-557.

Kim  A, W. S., Willson,  B. 2011. effect of Gingerole on colon cancer incidence and mortality. Medical Scape, 13(23): 51-76.

Kujubut, F. B., Varnum, B.C., Lim, R.W., Herschman, H.R. 1991. TIS10, a phorbol ester tumor promoter-inducilble mRNA from Swiss 3t3 cells, encodes a novel prostaglandin synthase/cyclooxygenase homologue. The Journal of Biological Chemistry, 26(55): 126-187.

Mohebbi, M. M., Wolfe, R., Nourijelyani, K., Mohammad, K., Zeraati, H., et al. 2008.Geographical spread of gastrointestinal tract cancer incidence in the Caspian Sea region of Iran: spatial analysis of cancer registry data. Bio Medical Centeral Cancer, 8(18): 137-165

Xie, C. J., Robertson, DL., Erikson, RL., Simmous, D.L. 1991. Expression of a mitogen-responsive gene encoding prostaglandin synthease in regulated by mRNA splicing. Proceding of  National Academy Science USA, 88(95): 2692-2696.

Seong-Ho LeeSeung Joon Baek     Maria Cekanova. 2008. Multiple Mechanisms Are Involved in 6-Gingerol-Induced Cell Growth Arrest and Apoptosis in Human Colorectal Cancer Cells, 47(3): 197–208.

Yang,  J. H., Young, J. 2011. Increased Growth Inhibitory Effects on Human Cancer Cells and Anti-inflammatory Potency of Shogaols from Zingiber officinale Relative to Gingeroles.Journal of Clinica Chimica Acta, 14(26): 51-76.

Zick, S.M., Tugenen, P.K., Brenner,   P.E.­ 2015.  Effect  of  ginger  root  on  eico  sanoid  in  colon mucosa in people at normal risk for colorectal cancer. Journal of Cancer Prevention, 5(6):12-14.